Serviço de Microarray de Perfilagem de Expressão de MicroRNA

A profilagem da expressão de microRNA (miRNA) através de microarrays constitui um método sofisticado para elucidar a regulação genética a nível pós-transcricional. Esta técnica permite aos investigadores examinar padrões de expressão de miRNA em diversas condições biológicas e espécies, oferecendo assim profundas percepções sobre vários processos celulares e mecanismos de doenças. A CD Genomics oferece um serviço abrangente de profilagem de microarrays de miRNA, utilizando plataformas de ponta reconhecidas pela sua excecional precisão e sensibilidade.

O que é o Perfilamento de Expressão com Microarrays

A profilagem de expressão com microarrays é uma técnica sofisticada de alta capacidade que permite a medição simultânea dos níveis de expressão de milhares de genes. Este método envolve a hibridação de amostras de RNA a um microarray chip embutido com sondas complementares. Ao capturar e quantificar os sinais de hibridização, os investigadores podem avaliar a expressão génica numa ampla gama de condições. Esta abordagem é fundamental para identificar genes com expressão diferencial, elucidar redes regulatórias complexas e investigar os mecanismos moleculares subjacentes a vários processos biológicos.

Como Fazer Profiling de miRNA

A caracterização de microRNA é essencial para decifrar a regulação genética e elucidar os mecanismos da doença. Abaixo está uma visão geral simplificada das metodologias empregues:

1. Métodos Tradicionais

• Northern BlottingEsta abordagem clássica detecta miARNs através da hibridação de sondas. Embora seja fiável, caracteriza-se por uma baixa sensibilidade, requer quantidades substanciais de RNA e é intensiva em tempo.
• MicroarranjoEsta técnica permite a deteção de alto rendimento ao hibridizar miARNs com sondas de ADN num chip. Avanços como sondas modificadas com LNA e melhorias baseadas em nanopartículas melhoraram significativamente a sua sensibilidade e especificidade.
• qRT-PCRConsiderada o padrão-ouro, a qRT-PCR oferece uma sensibilidade e especificidade excecionais. Técnicas como a adição de cauda e a RT-PCR em laço abordam os desafios colocados pelas curtas sequências de miRNA, com as sondas TaqMan a fornecerem uma especificidade superior, embora a um custo mais elevado em comparação com os métodos SYBR Green.
• PCR digital em gota (ddPCR)Uma nova inovação, ddPCR permite a quantificação absoluta de miARNs com alta sensibilidade e precisão. Envolve a divisão de amostras em gotas individuais e a quantificação de miARNs sem depender de curvas padrão.

2. Métodos Emergentes

• Detecção Baseada em NanomateriaisEsta abordagem utiliza nanomateriais como nanopartículas de ouro e pontos quânticos para melhorar as capacidades de deteção. Técnicas como ensaios colorimétricos e métodos baseados em fluorescência oferecem uma sensibilidade aumentada e requisitos de amostra reduzidos.

O que é um Microarray de miRNA

As microarrays de miRNA são ferramentas analíticas avançadas projetadas especificamente para detectar e quantificar perfis de expressão de miRNA. Ao contrário dos microarrays de expressão génica convencionais, que visam o mRNA, os microarrays de miRNA utilizam sondas que são específicas para sequências de miRNA. Isso permite a deteção simultânea de milhares de miRNAs, oferecendo uma visão abrangente da expressão de miRNA em várias condições.

A proeminência da análise de perfis de expressão de miRNA decorre da compreensão de que os miRNAs altamente expressos em tecidos, tipos celulares ou estágios de desenvolvimento específicos desempenham frequentemente papéis regulatórios cruciais. Para uma análise precisa e eficiente, é aconselhável envolver especialistas em miRNA e tecnologias de microarranjos. Estes especialistas operam em laboratórios de última geração que seguem rigorosos protocolos de controlo de qualidade e fornecem resultados rápidos. Eles oferecem análises de dados sofisticadas adaptadas às necessidades específicas da sua investigação, garantindo tanto resultados de alta qualidade como a conformidade com as restrições orçamentais.

Vantagens e Características do Microarray de miRNA

• Alto RendimentoAs microarrays de miRNA podem detectar milhares de miRNAs simultaneamente, proporcionando uma forma eficiente de perfilar a expressão de miRNA de forma abrangente.
• Cobertura AbrangenteEles abrangem uma ampla gama de miARNs conhecidos, detectando tanto miARNs abundantes como de baixa abundância para uma análise de expressão completa.
• Reproduzibilidade: Microarranjos oferecer resultados consistentes e fiáveis, permitindo comparações precisas da expressão de miRNA entre diferentes experiências e condições.
• Custo-EfetividadeComparado a Sequenciação de RNAOs microarrays de miRNA são mais económicos para perfis em grande escala, oferecendo um bom valor para estudos extensivos.
• Alta SensibilidadeEstes microarrays são projetados para detectar miARNs em baixas concentrações, garantindo uma medição precisa e exata dos níveis de expressão.
• Flexibilidade total de conteúdo (todas as espécies)
• Probes de hibridação de RNA otimizados
• Solução económica e integrada
• Prestador de serviços experiente a lidar com vários tipos de amostras de pesquisa e clínicas (incluindo amostras FFPE e de sangue/plasma)

Aplicações do Microarray de miRNA

• Para distinguir assinaturas de expressão associadas ao diagnóstico, prognóstico e intervenções terapêuticas.
• Realizando uma análise genómica da expressão de miRNA em amostras normais e de doença, como o câncer.
• A caracterização da expressão de miRNA revela alterações associadas a doenças como condições cardiovasculares, distúrbios neurológicos e síndromes metabólicas, o que pode ajudar a identificar potenciais alvos terapêuticos.
• Na descoberta de fármacos, microarrays de miRNA ajudam a identificar alvos de miRNA e a avaliar os efeitos de candidatos a fármacos na expressão de miRNA, facilitando a criação de terapias inovadoras.
• A análise genómica da expressão de miRNA em amostras normais e doentes, como o câncer, ajuda a distinguir perfis de expressão relevantes para diagnóstico, prognóstico e respostas ao tratamento.

Fluxo de Trabalho de Microarray de miRNA

Especificações do Serviço

	Requisitos de Amostra Vários amostras, incluindo tecido, soro, plasma, FFPE, etc. RNA total ≥200 ng por amostra; Tecido Animal: Não menos de 200 mg; Células Animais: Pelo menos 10^7 células. Nota: Os montantes de amostra são apresentados apenas para referência. Para informações detalhadas, por favor contacte-nos com os seus pedidos personalizados.
Clique	Estratégia de Sequenciamento Múltiplas plataformas pode consultar as seguintes recomendações e serviço personalizado.
	Análise Bioinformática Fornecemos múltiplas análises de bioinformática personalizadas: QC de dados brutos Análise de componentes principais (ACP) Triagem de miRNA de expressão diferencial Construção da rede GO Construção de rede de vias análise da rede ceRNA (RNA endógeno competidor) Análise do curso temporal Nota: Os dados recomendados e os conteúdos de análise apresentados são apenas para referência. Para informações detalhadas, por favor contacte-nos com os seus pedidos personalizados.

Recomendações e Serviço Personalizado

Tabela 1 Arrays de Expressão de miRNA Agilent

Tabela 2 Arrays de Expressão de miRNA Affymetrix

Tabela 3 Cartões TaqMan® Array MicroRNA

Pipeline de Análise

Entregáveis

• As imagens de microarray originais e processadas
• Um ficheiro de layout de array
• Um ficheiro de dados de intensidade bruta em Excel
• Um ficheiro de dados totalmente processado em Excel
• Uma lista de transcritos regulados para cima e para baixo que são identificados com base numa análise estatística.
• Além disso, para cada lote de amostras, o cliente recebe um resumo de dados contendo um catálogo de ficheiros de dados, imagens de regiões representativas dos arrays correspondentes e descrições de características específicas dos arrays.

A CD Genomics também pode ajudar a criar o seu microarray de miRNA personalizado. Estamos prontos para ajudá-lo com as suas necessidades de array personalizado, seja um design padrão ou algo mais criativo.

Para mais detalhes, sinta-se à vontade para nos contactar com quaisquer perguntas, preenchendo um formulário sem compromisso. Pedido de Cotação.

Os resultados parciais estão mostrados abaixo:

1. Que tipos de amostras podem ser utilizadas para o perfilamento de microarrays de miRNA?

A perfuração de microarrays de miRNA pode ser realizada utilizando vários tipos de amostras, incluindo tecidos, células e biofluidos como plasma ou soro. É crucial utilizar métodos de extração de RNA que preservem pequenos RNAs para garantir uma perfuração precisa de miRNA.

2. Quanto tempo demora um experimento de microarray de miRNA?

A duração de um experimento de microarray de miRNA, que abrange a preparação da amostra até à análise de dados, varia geralmente de vários dias a algumas semanas. Este período é influenciado pela complexidade do setup experimental e pelo número de amostras processadas.

3. Os microarrays de miRNA são adequados para todos os tipos de estudos de miRNA?

As microarrays de miRNA são bem adequadas para investigações envolvendo miRNAs conhecidos e são eficazes para aplicações como a descoberta de biomarcadores e estudos funcionais. No entanto, podem não detectar todos os miRNAs novos ou menos caracterizados.

4. Como se comparam as microarrays de miRNA com o sequenciamento de RNA?

Enquanto Sequenciação de RNA fornece uma análise mais exaustiva e identifica miARNs novos, as microarrays de miARNs são uma opção económica e de alto rendimento que fornece dados robustos para miARNs conhecidos.

Perfil de variação da expressão de LncRNA-miRNA-mRNA na urina de pacientes com pedras de oxalato de cálcio

Revista: BMC Genómica Médica
Fator de Impacto: 3,622
Publicado: 29 de abril de 2019

Fundo

Urolitíase, especialmente pedras de oxalato de cálcio (CaOx), é comum e problemática, com altas taxas de recorrência. Fatores como hiperoxalúria e inflamação contribuem para a formação de pedras. MicroARNs e longas RNAs não codificantes desempenham papéis na regulação da expressão genética e podem influenciar a formação de pedras. Este estudo analisa amostras de urina de pacientes com urolitíase para explorar as interações entre miARNs, mARNs e lncARNs, utilizando microarranjo tecnologia para uma compreensão abrangente.

Materiais e Métodos

Resultados

Em amostras de urina de pacientes com cálculos renais de CaOx, os autores identificaram nove miARNs com alterações significativas, incluindo quatro que estavam reguladas para cima e cinco reguladas para baixo. Além disso, a análise revelou alterações em 883 mARNs e 1002 lncARNs, com muitos deles regulados para cima ou para baixo no grupo dos cálculos em comparação com os controles. Os autores construíram uma rede ceRNA para explorar as interações entre esses RNAs diferencialmente expressos, destacando relações regulatórias e vias chave envolvidas na formação de cálculos de CaOx, incluindo a produção de ROS e vários processos metabólicos.

Tabela 1. Total de miARNs diferencialmente expressos entre o grupo formador de pedras e o grupo normal

Fig 1. Agrupamento hierárquico e gráficos de vulcão de miRNA, mRNA e lncRNA desregulados.

Fig 2. A rede CeRNA respondeu às variações de miRNA, mRNA e lncRNA na urina de pacientes com pedras de CaOx.

Conclusão

O estudo definiu claramente as diferenças na expressão de miRNA, mRNA e lncRNA na urina entre pacientes com cálculos de CaOx e indivíduos saudáveis, utilizando análises de GO e KEGG para descobrir funções e vias gênicas relevantes. Este trabalho pode levar a novos biomarcadores diagnósticos ou alvos de tratamento para cálculos renais de CaOx e orientar futuras pesquisas sobre os mecanismos da urolitíase.

Referência

1. Liang X, Lai Y, Wu W, et al. Perfil de variação da expressão de LncRNA-miRNA-mRNA na urina de pacientes com pedras de oxalato de cálcio. BMC Genómica Médica. 2019, 12:1-1.