Diretrizes para Submissão de Amostras
Por que a Sequenciação de tRNA é Importante
Enquanto tradicional transcriptómica e perfilagem de ribossomas têm transformado a nossa compreensão da expressão genética, a complexidade da biologia do RNA transferidor (tRNA) continua a ser uma fronteira pouco explorada. Os tRNAs são moléculas essenciais que fazem a ponte entre os códon de mRNA e os aminoácidos, controlando diretamente a síntese de proteínas. No entanto, alterações subtis na abundância de tRNA, modificações químicas ou estado de carga podem influenciar significativamente a regulação da tradução, impactando a saúde e a doença.
Moderno Métodos de sequenciação de tRNA abriram novas possibilidades para estudar estas moléculas com um detalhe sem precedentes. Ao aproveitar tecnologias como plataformas de sequenciação de tRNA por nanoporeos investigadores podem analisar o comprimento da sequência de tRNA, detetar modificações pós-transcricionais críticas e explorar como as populações de tRNA mudam em resposta a stress, progressão do câncer, distúrbios metabólicos ou infeções virais.
Além disso, insights de serviços de sequenciação de tRNA contribuir para a construção de um abrangente bancos de dados de sequências de tRNA, apoiando estudos avançados em genómica, medicina translacional e desenvolvimento terapêutico. O perfilamento do tRNAome tornou-se essencial para decifrar a adaptação celular e descobrir novos biomarcadores ou alvos terapêuticos.
Na investigação e desenvolvimento de medicamentos, a capacidade de caracterizar com precisão a comprimento da sequência de tRNA e o panorama de modificação assegura uma interpretação precisa das respostas celulares, ajudando a evitar interpretações erradas e a acelerar descobertas.
Visão Geral do Serviço
Na CD Genomics, oferecemos uma solução abrangente serviço de sequenciação de tRNA concebido para iluminar as complexidades da regulação translacional e da adaptação celular. Aproveitando tanto abordagens tradicionais Métodos de sequenciação de tRNA e inovador sequenciação de tRNA tecnologias de nanoporooferecemos uma perspetiva sem igual sobre a dinâmica do tRNA em vários contextos biológicos.
Os nossos serviços capturam dados críticos sobre:
- Abundância de tRNA: Quantificar os níveis em diferentes tecidos, tipos celulares ou condições experimentais.
- Modificações de tRNA: Identificar e localizar alterações químicas que afetam a estabilidade e a função do tRNA.
- Comprimento da sequência de tRNA: Detetar moléculas de tRNA de comprimento completo para mapeamento e análise precisos.
- Estado de aminoacilação: Medir o estado de carga dos tRNAs, vital para compreender a eficiência da tradução.
A experiência da CD Genomics garante:
- Sequenciação direta de tRNA nativo sem cDNA ou PCR, minimizando viés e preservando modificações naturais.
- Criação de bases de dados de sequências de tRNA fiáveis e de alta qualidade para investigação subsequente.
- Soluções de bioinformática poderosas que oferecem visualizações prontas para publicação, incluindo gráficos de vulcão, mapas de calor e gráficos de dispersão.
Por que escolher a CD Genomics para sequenciação de tRNA?
✅ Métodos Avançados de Sequenciação de tRNA
Oferecemos tanto protocolos tradicionais como sequenciação de tRNA por nanoporo soluções, permitindo a resolução de moléculas únicas e a deteção direta de modificações nativas sem a necessidade de conversão em cDNA ou PCR. Isto garante um perfilamento de tRNA altamente preciso e abrangente.
✅ Sequenciação de tRNA de Comprimento Completo
Captura completa comprimento da sequência de tRNA informação para mapeamento preciso e deteção de variantes, crucial para compreender a regulação translacional e identificar alterações específicas de doenças.
✅ Deteção Abrangente de Modificações
Detetar diversas modificações pós-transcricionais, como a metilação e a pseudouridilação, revelando como estas alterações químicas impactam a estabilidade, o dobramento e a função do tRNA.
✅ Análise de Aminoacilação
Meça os pools de tRNA carregados e não carregados para explorar como a dinâmica de aminoacilação afeta a eficiência da tradução—um fator chave em estudos de doenças e investigação terapêutica.
✅ Alta Sensibilidade com Baixos Requisitos de Entrada
Os nossos fluxos de trabalho otimizados proporcionam resultados de alta qualidade a partir de material inicial mínimo, tornando serviços de sequenciação de tRNA acessível para amostras preciosas ou limitadas.
✅ Integração Extensiva de Bases de Dados de Sequências de tRNA
Beneficie-se da nossa seleção cuidada e autoritária bancos de dados de sequências de tRNAque melhoram a precisão da anotação e permitem uma análise bioinformática robusta.
✅ Visualizações de Dados Prontas para Publicação
Fornecemos figuras de alta qualidade, incluindo gráficos de vulcão, mapas de calor e gráficos de dispersão, adequados para publicações, apresentações ou submissões regulatórias.
✅ Apoio Especializado em Bioinformática
A nossa equipa de especialistas em bioinformática oferece análise de dados de ponta a ponta, fornecendo insights adaptados aos seus objetivos de pesquisa específicos.
Fluxo de Trabalho / Como Funciona
Preparação de Amostras
Extração e purificação de RNA total ou RNA pequeno a partir de diversos tipos de amostras.
Processamento de tRNA
Desacilação e ligação de adaptadores, garantindo alta eficiência para comprimento total. comprimento da sequência de tRNA captura.
Construção de Biblioteca
Criação de bibliotecas adequadas para sequenciação de alto rendimento ou sequenciação direta de RNA nativo.
Sequenciação
Sequenciação de alta resolução utilizando plataformas Illumina ou sistemas baseados em nanoporos para análise direta de RNA.
Análise Bioinformática
Processamento de dados abrangente, anotação contra fontes autorizadas. bancos de dados de sequências de tRNAe geração de visualizações prontas para publicação.
Entregáveis de Bioinformática
Pipeline de Análise
- Análise de Expressão Diferencial
Identifica diferenças significativas na comprimento e abundância da sequência de tRNA em diferentes condições. As representações visuais incluem gráficos de vulcão, gráficos de dispersão e mapas de calor. - Detecção e Mapeamento de Modificações
Deteta e anota modificações pós-transcricionais dentro das sequências de tRNA, revelando o seu impacto funcional na tradução e nos processos de doença. - Perfil de Estado de Aminoacilação
Medidas de pools de tRNA carregados vs. não carregados, fornecendo informações sobre a eficiência da tradução e a adaptação metabólica. - Identificação de Variantes e Isoformas
Detecta variantes de sequência, mutações e isoformas novas utilizando bases de dados de sequências de tRNA curadas, apoiando a investigação de biomarcadores de doenças e o desenvolvimento terapêutico. - Relatórios Personalizados
Entrega relatórios interativos prontos para publicação, formatados para apresentações científicas, publicações ou submissões regulatórias. - Suporte à Integração de Dados
Integra os resultados de tRNA-seq com outros conjuntos de dados ómicos (por exemplo, transcriptómica, proteómica) para obter insights biológicos mais profundos.
Saída de Dados
- Formatos: FASTQ, BAM, VCF, tabelas de expressão delimitadas por tabulação
- Visualizações: mapas de calor, gráficos de dispersão, gráficos de vulcão, gráficos de variantes
- Ficheiros de anotação: GFF3, BED ou formatos personalizados a pedido.
- Relatórios: resumos em PDF, folhas de Excel interativas
Tipos de Amostras Suportados
- RNA total de tecidos, células, fluidos
- Amostras de RNA de baixo input
- Frações de tRNA purificado
- Amostras desafiadoras com altos níveis de modificação
Infraestrutura de Computação
- Clusters de computação de alto desempenho
- Pipelines de bioinformática dedicados otimizados para:
dados de sequenciação de tRNA por nanopore
- Sequenciação de tRNA de leitura curta tradicional
- Ambientes de análise personalizados disponíveis mediante solicitação.
Especialização em Bioinformática
Suporte para:
- Consulta de design experimental
- Análise e interpretação estatística
- Preparação de figuras e tabelas para publicação
- Conhecimento especializado em biologia do tRNA e análise de modificação
Aplicações
🔬 Investigação do Cancro e Biologia Tumoral
Investigar como as alterações em comprimento da sequência de tRNAA abundância e as modificações impulsionam a oncogénese, a metástase e a resistência à terapia. Identifique potenciais biomarcadores baseados em tRNA para diagnósticos ou alvos terapêuticos.
🧬 Estudos de Regulação Translacional
Compreender como as células ajustam a expressão genética através de alterações dinâmicas nas populações de tRNA, modificações e estado de aminoacilação sob diferentes condições fisiológicas ou patológicas.
🧪 Descoberta de Biomarcadores e Medicina Personalizada
Alavancagem serviço de sequenciação de tRNA dados para descobrir novos biomarcadores e desenvolver estratégias de medicina de precisão adaptadas aos perfis de tradução específicos dos pacientes.
🦠 Doenças Infecciosas e Virologia
Explore como os vírus manipulam o hospedeiro. bancos de dados de sequências de tRNA e pools de tRNA para otimizar a tradução de proteínas virais e evadir respostas imunes.
🧠 Doenças Neurodegenerativas e Metabólicas
Analise a desregulação do tRNA implicada em distúrbios como a doença de Huntington, neurodegeneração e síndromes metabólicas, apoiando a pesquisa terapêutica.
🧫 Biologia Sintética e Biotecnologia
Otimize o uso de códons e a eficiência da tradução através do mapeamento. sequenciação de tRNA por nanopore dados, melhorando os designs de edição genética e construções sintéticas.
⚙️ Terapia Génica e Desenvolvimento de ATMP
Obtenha insights sobre a dinâmica do tRNA, críticos para o design de produtos medicinais terapêuticos avançados (ATMPs), melhorando a eficiência de tradução e os perfis de segurança.
Requisitos de Amostra
| Tipo de Amostra | Montante Mínimo | Notas |
|---|---|---|
| Células | 2 × 10⁶ células | Colhido em condições livres de RNase. |
| Tecido | 50 mg | Fresco ou congelado; armazenado a -80°C. |
| Sangue Total / Soro / Plasma | 2–3 mL | Colete em tubos de EDTA ou heparina; armazene a -80°C. |
| Líquido Cefalorraquidiano (LCR) | 5 mL | Armazenar a -80°C; evitar ciclos de congelamento-descongelamento. |
| Urina | 50 mL | Centrifugar para pelotar as células, se necessário; armazenar o pellet a -80°C. |
| RNA total | ≥ 2 µg | OD260/280 ≥ 1,8; OD260/230 ≥ 1,5; RNA intacto com bandas claras na eletroforese. |
Recomendações de Armazenamento e Envio:
- Envie amostras em gelo seco para evitar degradação.
- Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.
- Para amostras de RNA, dissolva em água livre de RNase ou etanol e armazene a -80°C.
- Contacte-nos se o seu tipo de amostra não estiver listado ou se tiver material limitado; oferecemos soluções personalizadas para projetos desafiantes.
Perguntas Frequentes (FAQ)
Q1. O que é a sequenciação de tRNA e como se diferencia de outros métodos de RNA-seq?
A1A sequenciação de tRNA foca especificamente nas moléculas de RNA transportador (~70–90 nt), capturando as suas abundância, modificações pós-transcricionaise estado de aminoacilação (carga)Ao contrário do RNA-seq padrão, que enfatiza os mRNAs e pode ignorar as modificações do tRNA e o processamento mais subtil, o nosso sequenciação de tRNA com nanoporo e tradicional Métodos de sequenciação de tRNA estão otimizados para lidar com a natureza estruturada e quimicamente modificada dos tRNAs, permitindo um perfil completo e consciente das modificações.
Q2. Que plataformas de sequenciação você utiliza?
A2A CD Genomics utiliza plataformas de leitura curta (por exemplo, Illumina) para sequenciação tradicional de tRNA e sequenciação por nanoporo de terceira geração (e.g., Oxford Nanopore) para sequenciação direta e de comprimento total sequência de tRNA e deteção de modificações—sem viés de cDNA ou PCR.
Q3. Que tipos de amostras e quantidades de entrada são necessárias?
A3. Aceitamos células, tecidos, fluidos corporais (por exemplo, sangue, LCR, urina) e RNA total purificado. As entradas mínimas são: 2×10⁶ células, 50 mg de tecido, 2–3 mL de sangue/soro/plasma, 5 mL de LCR, 50 mL de urina ou ≥ 2 μg de RNA total (OD260/280 ≥ 1.8; OD260/230 ≥ 1.5). As amostras devem ser enviadas em gelo seco e armazenadas a –80 °C para preservar a integridade para serviço de sequenciação de tRNA. (Como detalhado no Requisitos de Amostra secção.)
Q4. Que prazos de entrega e resultados posso esperar?
A4Trabalhamos de forma eficiente para garantir a entrega atempada dos seus resultados. Os clientes recebem: relatórios de bioinformática interativos, dados de sequenciação brutos (FASTQ/BAM), contagens quantitativas, visualizações de vulcões e mapas de calor, mapeamento de modificações, perfilagem de aminoacilação e gráficos de qualidade para publicação. Confirmaremos um cronograma detalhado quando fizer a sua encomenda.
Q5. Quantas amostras ou réplicas devo incluir?
A5Recomendamos pelo menos três réplicas biológicas por grupo para apoiar uma análise robusta de expressão diferencial e análise estatística. Embora réplicas técnicas não sejam necessárias, oferecemos multiplexação de bibliotecas minimizar custos sem sacrificar a qualidade.
Q6. Que controlos de qualidade estão em vigor?
A6Realizamos um controlo de qualidade rigoroso ao longo de todo o fluxo de trabalho utilizando:
- Amostra de QC (Qubit, NanoDrop, Bioanalisador)
- QC da Biblioteca (Bioanalisador, qPCR)
- Controlo de QC de Sequenciação (controles específicos da plataforma)
- QC de dados com ferramentas como o FastQC
Todos os resultados de QC são fornecidos com o seu pacote de dados.
Q7. Consegue detetar todas as modificações de tRNA e medir a aminoacilação?
A7. Sim, detetamos uma ampla variedade de modificações (por exemplo, metilação, pseudouridilação) através da comparação de sinais modificados e não modificados em sequenciação de tRNA por nanoporo Os tRNAs carregados e descarregados são distinguíveis através de sinais característicos em protocolos dedicados como aa-tRNA-seq.
Q8. Como é que anota sequências de tRNA?
A8As sequências estão alinhadas com a nossa curadoria. base de dados de sequências de tRNA, aproveitando ferramentas como o tRNAscan-SE juntamente com algoritmos que têm em conta as modificações, garantindo uma anotação precisa de isoformas e variantes.
Q9. Está disponível uma amostra de baixo input ou desafiadora?
A9Definitivamente. Apoiamo workflows de baixo input e preparação de bibliotecas personalizada para amostras limitadas ou preciosas, utilizando estratégias de desmetilação e adaptadores para maximizar o rendimento e a qualidade dos dados.
Q10. Como posso começar?
A10Contacte a nossa equipa para discutir os objetivos do projeto, o tipo de amostra e o contexto da pesquisa. Iremos propor um plano personalizado, fornecer um orçamento e orientá-lo na preparação da amostra. Uma vez acordado, você envia as amostras em gelo seco, e nós tratamos do resto—entregando dados de alta qualidade e interpretação especializada.
Nano-tRNAseq: Perfil de Abundância e Modificação Quantitativa de tRNA
1. Contexto
Os métodos tradicionais para a análise de tRNA sofrem de viés significativo devido à transcrição reversa, amplificação por PCR e à incapacidade de detectar modificações no tRNA. Como os tRNAs apresentam cerca de 13 modificações por molécula que impactam a tradução e doenças, um método preciso para quantificar simultaneamente a abundância e as modificações é essencial.
2. Métodos
Os autores desenvolveram Nano-tRNAsequm protocolo de sequenciação de nanoporos de RNA direto que inclui:
- Dupla ligação de adaptadores 5' e 3' a tRNAs maduros
- Demetilação e desacetilação para melhorar a ligadura de adaptadores
- Reprocessamento de sinais brutos do MinKNOW para recuperar leituras de tRNA
- Sequenciação comparativa de tRNAs transcritos in vitro (IVT) e nativos de S. cerevisiae
Fig. 1b apresentando o esquema de preparação da biblioteca mostrando as ligações de adaptadores no tRNA. Rotule isto imediatamente abaixo do esquema.
3. Resultados
- Aumento de 12 vezes nas leituras de tRNA utilizando parâmetros personalizados do MinKNOW em comparação com os padrões.
- Alta reprodutibilidade das medições de tRNA nativo (ρ de Spearman = 0,984).
- Quantificação de abundância precisa em comparação com técnicas baseadas em Illumina (ρ = 0,93).
- Deteção de interdependências de modificação (por exemplo, a perda de Ψ55 afetando m¹A58, m⁵U54) e a deadenilação da cauda CCA sob stress oxidativo.
Fig. 1d gráfico de dispersão mostrando replicabilidade
Fig. 9a mapa de calor de erros de chamada base em knockout de PUS4.
4. Conclusões
O Nano-tRNAseq oferece uma custo-efetivoabordagem de alto rendimento com resolução de molécula única para quantificar com precisão a abundância e os estados de modificação do tRNA. Supera os preconceitos dos métodos tradicionais e estabelece uma estrutura para estudar o "tRNAome" em doenças, resposta ao stress e descoberta de biomarcadores.
