Serviço de Sequenciação de Metilação de RNA

O que são modificações de RNA

As modificações de RNA desempenham um papel fundamental na regulação epigenética da expressão gênica pós-transcricional. Embora tenham sido realizados extensos estudos sobre as modificações de RNA m6A, vários outros tipos de modificações de RNA também participam da regulação da expressão gênica pós-transcricional. Estes incluem m1A, m5C, m7G, 2'-O-metilação e acetilação ac4C. Notavelmente, os estudos em andamento nessas áreas continuam a gerar publicações de alto impacto.

A CD Genomics é um líder em sequenciação de modificações de RNA, oferecendo um conjunto abrangente de serviços de sequenciação de modificações de RNA adaptados para mRNA e vários RNAs não codificantes. Os nossos serviços abrangem um espectro de modificações de RNA, incluindo m6A, m1A, m5C, m7G, ac4C, 2'-O-metilação e pseudouridina (Ψ), contribuindo para o avanço da compreensão do intrincado panorama das modificações de RNA.

(Jinghui Song et al., ACS Química Biológica. 2017)

Métodos de Detecção de Modificação de RNA

Sequenciação de Metilação de RNA m6A: Técnicas Sensíveis que Detectam Simultaneamente Modificações m6A em mRNA, lncRNA e RNA Circular

Sequenciação de Metilação de RNA m6A em Níveis Quantitativos e de TraçoMeRIP/m6A-seq)

A metilação m6A é uma modificação de RNA amplamente disseminada em organismos eucarióticos, incluindo mRNA e até RNA viral. Embora a modificação m6A tenha sido reportada já na década de 1970, o conhecimento abrangente sobre a sua distribuição geral no RNA e o seu impacto na regulação da expressão génica tem sido limitado. A descoberta da primeira demetilase de RNA genuína, FTO, em 2011 renovou o interesse pela metilação de mRNA/lncRNA.

MeRIP, utilizando anticorpos específicos para m6A para enriquecimento seguido de sequenciação, é um método concebido para investigar modificações de metilação de adenosina em RNA. A EasyGene desenvolveu de forma independente uma tecnologia de deteção de metilação de RNA a nível de traço, permitindo a redução da entrada de amostra para 10-20 μg, com um requisito mínimo de apenas 5 μg de RNA total. Este avanço facilita a análise precisa das modificações de m6A em várias espécies de RNA, incluindo mRNA, lncRNA e RNA circular.

Sequenciação de Metilação de RNA m5C: Tratamento com Bisulfito para Detecção de Níveis de Modificação m5C com Precisão de Base Única

Metilação de RNA m5C (RNA-BS-seq, m5C)

Entre as numerosas modificações de RNA, o m5C é um dos mais estudados. Quando presente no tRNA, o m5C pode regular a tradução; no rRNA, desempenha um papel no controlo de qualidade durante a biogénese do ribossoma, e quando encontrado no mRNA, influencia a estrutura, estabilidade e processos de tradução do mRNA.

A RNA-BS-seq destaca-se como uma técnica poderosa para detectar m5C. Este método envolve o tratamento de RNA com bisulfito, convertendo citosinas (C) não modificadas em uracilos (U), enquanto as citosinas modificadas em m5C permanecem inalteradas. Através da PCR subsequente, os uracilos são convertidos em timinas (T), permitindo a discriminação entre m5C e C. Associada ao sequenciamento de alto rendimento, a RNA-BS-seq possibilita a deteção abrangente de modificações m5C em todo o transcriptoma.

(3) RIP-seqDesvendando Interacções RNA-Proteína através de Sequenciação Baseada em Imunoprecipitação

A sequenciação por imunoprecipitação de RNA (RIP-seq) é uma metodologia robusta utilizada para explorar o intrincado panorama das interações RNA-proteína, oferecendo insights sobre as associações dinâmicas entre moléculas de RNA e as suas proteínas interagentes. Esta técnica baseia-se na captura precisa de complexos RNA-proteína através da imunoprecipitação, facilitada por anticorpos direcionados contra a proteína de interesse.

Com uma importância considerável na exploração da regulação genética pós-transcricional, o RIP-seq serve como uma ferramenta fundamental para identificar alvos de RNA ligados a proteínas específicas. Após a imunoprecipitação, o RNA associado é meticulosamente isolado e submetido a sequenciação de alto rendimento, fornecendo um perfil abrangente das moléculas de RNA que participam ativamente nas interações proteicas. Esta abordagem desempenha um papel crucial no avanço da nossa compreensão dos processos celulares fundamentais, abrangendo o processamento de RNA, a localização e a estabilidade.

(4) Serviço de Sequenciação de Metilação de RNA por NanoporosRevelando os Detalhes Finais dos Padrões de Modificação de RNA com Precisão de Nucleótido Único

O nosso Serviço de Sequenciação de Metilação de RNA por Nanoporos representa uma solução avançada, adaptada para desvendar a paisagem subtil das modificações de RNA com uma precisão sem igual. Aproveitando as capacidades da tecnologia de sequenciação por nanoporos, este serviço oferece resolução de nucleótido único, facilitando a identificação e caracterização de diversas modificações de RNA, incluindo m6A, m1A, m5C, m7G, ac4C e 2'-O-metilação.

Distinguido pela sua capacidade de capturar nuances subtis nas modificações de RNA em várias espécies de RNA, incluindo mRNA e RNA não codificante, este serviço utiliza tecnologia de nanoporo para sequenciação em tempo real e de leituras longas. Esta abordagem garante a deteção de modificações com maior precisão e sensibilidade. Enfatizando uma análise abrangente e de alto rendimento, o nosso serviço capacita os investigadores a explorar o dinâmico reino das modificações de RNA, desvendando as suas implicações funcionais com profundos insights.

(5) 2'-O-Metilado-seqPerfilando Padrões de 2'-O-Metilação em Moléculas de RNA

O nosso serviço de sequenciação 2'-O-Metilada é dedicado a elucidar os intrincados padrões de 2'-O-metilação em moléculas de RNA. Esta modificação, que ocorre no grupo 2'-hidroxilo da ribose, desempenha um papel crucial na estabilidade e função do RNA. Aproveitando tecnologias de sequenciação de última geração, este serviço fornece dados de alta resolução sobre a distribuição de 2'-O-metilação em diversas espécies de RNA, incluindo mRNA, lncRNA, pri-miRNA, tRNA e rRNA.

Priorizando tanto a precisão como a eficiência, o 2'-O-Metilado-seq fornece informações valiosas sobre os locais específicos e a abundância dos sítios de 2'-O-metilação dentro das moléculas de RNA. O serviço destaca-se na manipulação de uma variedade de tipos de amostras, garantindo uma cobertura abrangente e uma deteção robusta dos eventos de 2'-O-metilação. Os investigadores podem confiar neste serviço para explorar o domínio nuançado da 2'-O-metilação, lançando luz sobre a sua relevância funcional e potenciais implicações nos processos biológicos.

acRIP-seq: Perfilagem de Alto Rendimento de Regiões de RNA Acetiladas

A Sequenciação por Imunoprecipitação de RNA Acetilado (acRIP-seq) representa uma abordagem pioneira para delinear padrões de acetilação de RNA em todo o transcriptoma. Esta técnica utiliza anticorpos que se ligam especificamente a bases nucleotídicas acetiladas, facilitando o enriquecimento de fragmentos de RNA acetilados mediado por imunoprecipitação. A subsequente sequenciação de alto rendimento permite uma análise abrangente da distribuição e frequência de locais acetilados em várias espécies de RNA. A acetilação, nomeadamente a N4-acetilcitosina (ac4C), foi identificada como uma modificação crucial que influencia a tradução de proteínas, a estabilidade do RNA e o splicing alternativo. Investigações recentes revelaram que a ac4C, anteriormente considerada predominantemente associada ao tRNA e ao rRNA 18S, está abundantemente presente em outros tipos de RNA. Estas descobertas sublinham o papel significativo da ac4C na regulação da expressão génica e destacam o seu potencial como um elemento central no campo da epitranscriptómica.

PA-Ψ-seq: Desvendando Modificações de Pseudouridina com Precisão de Nucleótido Único

A sequenciação Ψ assistida por fotocruzamento (PA-Ψ-seq) é uma metodologia sofisticada projetada para alcançar um mapeamento de alta resolução das modificações de pseudouridina (Ψ) ao nível de nucleotídeo único. Esta técnica utiliza fotocruzamento para estabilizar o RNA modificado por Ψ, seguido de enriquecimento mediado por anticorpos e sequenciação de alto rendimento. A PA-Ψ-seq destaca-se na geração de mapas abrangentes de modificações de pseudouridina em todo o transcriptoma, fornecendo informações valiosas sobre o papel das modificações de Ψ em vários processos biológicos, incluindo regulação genética e doenças. Embora a importância funcional da Ψ em rRNA e tRNA esteja bem estabelecida, o seu papel em mRNA tem permanecido elusivo devido a desafios técnicos na deteção. A PA-Ψ-seq aborda essas limitações, oferecendo uma ferramenta robusta para elucidar as implicações funcionais das modificações de Ψ em mRNA e examinar as suas potenciais alterações em condições patológicas, como o câncer.